Detektor UV DWD-1 (wysokowydajny podwójny promień podwójnej długości fali) Wbudowane przetwarzanie danych

Zakres długości fali: 254nm, 280nm (wykrywanie jednoczesne), inne dwie długości fali są wykrywane jednocześnie między liniami spektralnymi 254nm i 280nm-400nm.

* Charakterystyka instrumentu DWD-1

Rozmiar długości fali białka 280nm/254nm:

Białko zawiera aminokwasy aromatyczne, takie jak tyrozyna i triana. Mają właściwość wchłaniania światła ultrafioletowego, jego szczyt wchłaniania znajduje się na długości fali 280nm, a wartość gęstości światła wchłaniania szczytu w tej długości fali jest prawidłowo proporcjonalna do jego stężenia, więc może służyć jako podstawa do jakościowego i ilościowego określenia białka, dlatego metoda wchłaniania ultrafioletowego na 280nm jest zwykle stosowana do ciągłego monitorowania stężenia białka w systemie stratologicznym. Ale ze względu na różne zawartości tyrozyny i trycyny w różnych białkach, aby dokładnie określić ilość, należy porównać czyste białko do zbadania jako kryterium lub już znać jego współczynnik osłabienia jako odniesienie. Ponadto wiele substancji niebiałkowych ma również określoną zdolność wchłaniania w długości fali 280nm, co może powodować zakłócenia. Szczególnie silniejszy jest wpływ kwasów nukleowych (puriny i pyrymyny). Absorpcja jest 10 razy silniejsza (na gram) niż białko na 280 nm, ale kwas nukleowy jest silniejszy na 254 nm, a jego szczyt absorpcji znajduje się w pobliżu 254 nm. Współczynnik osłabienia kwasu nuklearnego przy 254 nm jest dwukrotnie większy niż przy 280 nm.

W przeciwieństwie do białka, wartość absorpcji UV 280nm jest większa niż wartość absorpcji 254nm.

Zwykle：

Współczynnik wchłaniania światła czystego białka: A280/A254” 1,8

Współczynnik pochłaniania światła czystego kwasu nuklearnego: A280/A254

W związku z tym, gdy kwas nukleowy jest obecny jednocześnie w roztworze białka (w większości układów biologicznych), należy mierzyć jednocześnie OD254nm i OD280nm. Następnie na podstawie stosunku wchłaniania dwóch długości fali, prawdziwa zawartość białka została obliczona za pomocą formuły empirycznej, aby wyeliminować wpływ kwasu nukleowego.

Stężenie białka: 1,45 x A280 – 0,74 x A254 (mg/ml)

Ta formuła empiryczna została ustalona na podstawie danych określonych przez szereg znanych różnych stosunków stężenia mieszaniny białka (enolazy drożdżowej) i kwasu nukleowego (kwas nukleowy drożdżowy).